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利用氨基酰化酶的專一性，只水解Ac-L-phe的酰氨鍵，生成L-phe,而不能水解Ac-D-phe的酰胺。然后根據L-phe和Ac-D-phe在水中的溶解度不同進行分離。而分離出的Ac-D-phe又可經消旋化生成Ac-DL-phe。再一次重復水解、分離。依次類推，可將Ac-DL-phe全部轉化為L-phe。固定化氨基酰化酶的制備將DEAE-sephadexa-50放入去離子水中充分浸泡后，再依次用10倍量的0.5mol/LHCl和0.5mol/LNaOH溶液充分攪拌處理30min。然后用去離子水洗至中性，最后分別Chemicalbook用0.1mol/L及0.01mol/L的pH=7.0的磷酸緩沖液處理1-2h,濾干，備用。取經培養40-50h的米麯擴大麯，用其6倍量的支離子水分2次提取，提取液用2mol/L的NaOH溶液調pH至6.7-7.0。然后按100L酶液和1kg濕DEAE-sephadexA-50的比例混合，于0-4℃攪拌吸附4-5h后，過濾取DEAE-sephadexA-50,并分別用去離子水0.1mol/LNaAc溶液、0.01mol/L的pH=7.0的磷酸緩沖液洗滌3-4次。過濾得固定化氨基酰化酶，加1%甲苯放入冷庫中貯存備用。